Также в качестве соединительных областей или линкерных пептидов можно применять фокусировка co2 лазера киев, расположенные между 1дУ-подобными доменами, в случае когда рецептор эпиляции лазером еленограде клетки содержит множественные последовательно расположенные как делают эпиляцию лазером домены, и между 1дС-подобными александритовый лазер в чем разница, когда рецептор поверхности клетки содержит множественные последовательно расположенные 1дС-подобные. Picengrave для лазерной гравировки фотографий. На примере этого хозяйства надо учиться, микро диодный лазерный учить прилегающие колхозы и совхозы. Последующая дезактивациявозбужденных молекул будет происха 2 о дить в основном на стенках вакуумной оболочки 1. Конструирование эксцепторных молекул с направлением их на определенные неодимовый лазер вологда купить клеток.
РУПП “БЕЛОРУССКИЙ АВТОМОБИЛЬНЫЙ ЗАВОД”
Согласно настоящему изобретению предложен мультиспецифичный связывающий белок для модулирования ингибирования активности T-клеток или блокирования реакций, опосредуемых T-клетками, содержащий домен, связывающий CD86, соединенный с гетерологичным связывающим доменом посредством промежуточного домена, характеризующийся тем, что указанный гетерологичный связывающий домен представляет собой агонист IL Мультиспецифичный гибридный белок также может содержать промежуточный домен, отделяющий другие участки.
Также согласно настоящему изобретению предложены полинуклеотиды, кодирующие мультиспецифичные гибридные белки, композиции, содержащие в составе гибридные белки, и способы применения мультиспецифичных гибридных белков и композиций. Иммунная система человека обычно защищает организм от вреда, наносимого чужеродными веществами и патогенами. В частности, было показано, что СЭ80 приводит к образованию негативного сигнала для пролиферации и секреции 1дС как в нормальных В-клетках, так и в В-клеточных лимфомах, тогда как СЭ86 повышает активность В-клеток Биуак е! Для обзора строения и функций СТЬА-4 см. Тей е! Связывание с рецептором Т-клеток в отсутствие связывания СЭ28 приводит либо к апоптозу Т-клеток, либо к подавлению иммунитета, опосредованного указанными клетками.
Также было показано, что сигналинг СЭ28 усиливает продукцию цитокинов Т-клетками. ЗсБ ИЗА, Тем не менее, не все пациенты отвечают на введение СТБАд. На фиг. Настоящее изобретение позволяет осуществлять направленное воздействие на антигенпрезентирующие клетки АПК с изменением их активности. Например, активность Т-клеток можно модулировать путем создания мультиспецифичных эксцепторных гибридных белков, содержащих первый связывающий домен, преимущественно связывающийся с СЭ86, и второй связывающий домен гетерологичный связывающий домен. В некоторых вариантах реализации применяют участок, меньший, чем полноразмерный эктодомен.
В дополнительных вариантах реализации агонист 1Ь представляет собой 1Ь или его функциональный фрагмент. В составе некоторых конструкций ГО может включать константную область иммуноглобулина или ее фрагмент, расположенную между указанными первым и вторым связывающими доменами. Перед приведением более подробного описания настоящего изобретения для лучшего понимания его может быть полезным предоставление определений отдельных терминов, употребляемых в настоящем документе. Дополнительные определения приведены в ходе описания настоящего изобретения. В настоящем описании подразумевается, что любой интервал концентрации, интервал процентных значений, интервал отношений или интервал чисел включает любое значение любого целого числа в пределах обозначенного интервала и, когда это целесообразно, его дробных частей например, одна десятая и одна сотая целого числа , если не указано обратного.
Также следует понимать, что любой интервал значений, указанный в настоящем описании, относящийся к любому физическому свойству, например к субъединицам полимера, размерам или толщине, включает любое число в пределах указанного интервала, если не указано обратного. Следует понимать, что единственное число, употребляемое в настоящем описании, может относиться к одному или более перечисляемых элементов. Предложение любого выбора например, при использовании союза или может подразумевать под собой одну, две или любое сочетание возможностей. Термины включает и содержит в тексте настоящего описания являются синонимами.
Также следует понимать, что описания определенных соединений или групп соединений, полученных из различных сочетаний структур и заместителей, приведенные в настоящем документе, приведены в тексте в той же степени, как для отдельного соединения или группы соединений. Следовательно, выбор определенных структур или определенных заместителей входит в объем настоящего изобретения. Указанные биологические молекулы включают белки, полипептиды, олигопептиды, пептиды, аминокислоты или их производные, липиды, жирные кислоты или их производные; углеводороды, сахараиды или их производные; нуклеотиды, нуклеозиды, пептиды нуклеиновых кислот, молекулы нуклеиновых кислот или их производные; гликозилированные белки, гликопептиды, гликолипиды, липопротеины, протеолипиды или их производные; другие биологические молекулы, которые могут присутствовать, например, в биологическом образце; или любое сочетание указанных молекул.
Связывающий домен включает любой встречающийся в природе, синтезированный, или полусинтезированный, или полученный рекомбинантным путем партнер для связывания с биологической молекулой или другой интересующей мишени. Для определения связывающих доменов согласно настоящему изобретению известно множество различных способов обнаружения специфического связывания с определенной мишенью, включая Вестерн блоттинг, ИФА или анализ с помощью прибора Биакор. К высокоаффинным областям связывания относятся связывающие домены, К а которых составляет по меньшей мере 10 7 , по меньшей мере 10 8 , по меньшей мере 10 9 , по меньшей мере 10 10 , по меньшей мере 10 11 , по меньшей мере 10 12 , по меньшей мере 10 13 М -1 или более.
Аффинность полипептидов и гибридных белков, содержащих связывающий домен согласно настоящему изобретению, можно с легкостью определить при помощи общепринятых методик см. Связывающие домены согласно настоящему изобретению можно получать согласно описанному в настоящем документе или при помощи различных способов, известных в данной области техники см. АсаД 8ст. Все общепринятые в данной области термины, относящиеся к методике работы с антителами, в настоящем описании несут смысл, придаваемый им в данной области, если в настоящем документе недвусмысленно не указано обратное. Например, термины У ь и У Н относятся к вариабельной связывающей области, полученной из легкой и тяжелой цепей антитела соответственно.
Вариабельные связывающие области состоят из дискретных, четко выраженных участков, известных как гипервариабельные участки СОК и каркасные участки РК. Сароп е! Далее, полипептид, содержащий Рс-фрагмент, подвержен димеризации и мультимеризации полипептида. Шарнирная область, также обозначенная в настоящем описании как линкер, представляет собой аминокислотную последовательность, расположенную между связывающей вариабельной областью и константной областью одной цепи антитела и соединяющую указанные области и, как известно в данной области, подобно шарниру, обеспечивающей подвижность антител и подобных антителам молекул.
Доменную структуру иммуноглобулинов можно подвергать конструированию, в ходе которого антигенсвязывающие домены и домены, отвечающие за эффекторные функции, можно переносить между разными классами и подклассами иммуноглобулинов. Полное собрание подробных лабораторных протоколов конструирования антител можно найти в К. Койетшапп апб 8. БиЬе1, Ебк. Также протоколы, относящиеся к указанной теме, доступны в Сштей Рго1осо1к ш 1ттипо1оду, Аидик! Термин биологический образец включает образец крови, образец, полученный с помощью биопсии, эксплантат ткани, культуру органа, биологическую жидкость, или любую другую ткань, или клетку, или любой другой препарат, полученный от субъекта или из биологического источника.
Субъектом или биологическим источником могут являться, например, животные, относящиеся или не относящиеся к роду человек, первичная культура клеток или адаптированная в культуре линия клеток, включая генетически сконструированные линии клеток, которые могут содержать включенные в хромосомы или эписомные рекомбинантные последовательности нуклеиновых кислот, гибридные линии соматических клеток, иммортализованные или подверженные иммортализации линии клеток, линии дифференцированных или подверженных дифференциации клеток, трансформированные линии клеток и им подобные. В дополнительных вариантах реализации настоящего изобретения субъект или биологический образец может быть потенциально поражен заболеванием или иметь риск поражения заболеванием, нарушением или состоянием, включая заболевание, нарушение или состояние, связанное со злокачественной опухолью, или нарушение, связанное с В-клетками.
В отдельных вариантах реализации субъект или биологический источник могут быть поражены заболеванием, связанным с повышенной пролиферацией, воспалительным заболеванием или аутоиммунным заболеванием, в других вариантах реализации настоящего изобретения может быть известно, что субъект или биологический источник может находиться вне риска поражения указанным заболеванием, нарушением или состоянием. Как было упомянуто в настоящем описании, СБ86 представляет собой трансмембранный белок I типа и является представителем суперсемейства иммуноглобулинов.
Домен, связывающий СБ86 согласно настоящему изобретению, способен блокировать связывание СБ86 с СБ28 и, следовательно, отрицательно регулировать активацию Т-клеток. В дополнительных вариантах реализации связывающий домен СГО86 содержит одноцепочечный иммуноглобулин подобный участок, например, 8сРу, обладающий специфичностью по отношению к СГО В одном аспекте связывающий домен СГО86 или гибридный белок, содержащий указанный связывающий домен согласно настоящему изобретению, обладает специфичностью по отношению к СГО86 и его аффинность описывается константой диссоциации КД значение которой составляет от приблизительно 10 -3 до менее чем приблизительно 10 -8 М.
В отдельных предпочтительных вариантах реализации связывающий домен СГО86 или гибридный белок, содержащий указанный связывающий домен, связывает СГО86 с аффинностью, составляющей приблизительно 0. В качестве иллюстративного примера можно привести возможность определения связывающих доменов СГО86 согласно настоящему изобретению с применением фаговой библиотеки РаЬ фрагментов см. В отдельных вариантах реализации молекула СЭ86, применяемая для создания домена, связывающего СЭ86, может дополнительно содержать промежуточный домен или домен димеризации согласно описанному в настоящем документе, например Рс-фрагмент иммуноглобулина или его участок.
В отдельных вариантах реализации домены У Н и У ъ происходят из организма человека. В любом из указанных или других вариантов реализации, описанных в настоящем документе, касающихся применения участков У ъ и У Н , домены У ъ и У Н могут быть расположены в любой ориентации и могут быть разделены линкером, длина которого может оставлять до 30 аминокислот согласно описанному в настоящем документе или любой аминокислотной последовательностью, способной обеспечивать функцию спейсера, совместимую с взаимодействием двух связывающихся доменов. В отдельных вариантах реализации линкер, соединяющий домены У ъ и У Н , содержит аминокислотную последовательность.
Мультиспецифичные связывающие домены должны содержать по меньшей мере два специфичных связывающих участка, по аналогии с организацией антитела верблюдовых, или по меньшей мере четыре специфичных связывающих участка, по аналогии с организацией более традиционного антитела млекопитающих, содержащего парные цепи У ъ и У Н. Ыа, ЛЬМ и связанные способы определения. Определение КаЬа! Определение СНобйа основано на расположении структурных петлевых фрагментов СЬо! США , ; Кее8 е! Дополнительный вариант определения, известный как контактное определение, был представлен ранее см.
МасСа11ит е! Участки СОК в составе тяжелой цепи принято обозначать как Н1, Н2 и Н3, последовательная нумерация которых осуществляется по порядку от Аконца к С-концу. Длина участка СОК-Н1 составляет приблизительно от 10 до 12 аминокислотных остатков, она начинается через четыре аминокислотных остатка после Су8 согласно способам определения СЬо! Длина Н1 составляет приблизительно от 10 до 12 аминокислотных остатков согласно способу определения АЬМ, тогда как способ определения СНобйа исключает последние четыре аминокислотных остатка. Согласно способу определения КаЬа! Участки СОК в составе легкой цепи принято обозначать как Ь1, Ь2 и Ь3, последовательная нумерация которых осуществляется по порядку от Аконца к С-концу.
Участок СОК-Ь1 обычно начинается приблизительно с 24 аминокислотного остатка, обычно ему предшествует остаток Су8. Длина СОК-1 составляет приблизительно от 10 до 17 аминокислотных остатков. Длина СОК-Ь2 составляет приблизительно семь аминокислотных остатков. Участок СОК-Ь3 обычно начинается через 33 аминокислотных остатка после окончания участка Ь2 и обычно ему предшествует остаток Су8, после указанного участка обычно следует последовательность РНе-О1у-ХХХ-О1у, и ее длина составляет от 7 до 11 аминокислотных остатков. Таким образом, связывающий домен согласно настоящему изобретению может включать один участок СОК вариабельной области антитела, направленного против СО86, или указанный связывающий домен может включать множество участков СОК, которые могут быть идентичными или могут различаться.
В отдельных вариантах реализации связывающие домены согласно настоящему изобретению включают домены У Н и У ъ , обладающие специфичностью по отношению к СО86, содержащие каркасные участки и участки СОК1, СОК2 и СОК3, где а домен У Н содержит аминокислотную последовательность СОК3 тяжелой цепи; или Ь домен У ъ содержит аминокислотную последовательность СОК3 легкой цепи; или с связывающий домен содержит аминокислотную последовательность У Н из а и аминокислотную последовательность У ъ из Ь ; или связывающий домен содержит аминокислотную последовательность У Н из а и аминокислотную последовательность У ъ из Ь и где У Н и У ъ находятся в составе одной и той же референтной последовательности.
Домен, связывающий СО86 в составе эксцепторных гибридных белков согласно настоящему изобретению, может представлять собой иммуноглобулин подобный домен, например каркасную область иммуноглобулина. Каркасные области иммуноглобулинов, предусматриваемые настоящим изобретением, включают, но не ограничиваются 8сРу, антитело, состоящее из одного домена или антитело, состоящее только из тяжелой цепи. В случае 8сРу настоящее изобретение предусматривает вариабельные области тяжелой и легкой цепей, соединенные с любым пептидным линкером, известным в данной области как совместимый с объединением доменов или участков в составе связывающей молекулы.
Если связывающий домен в составе гибридного белка согласно настоящему изобретению получен на основе иммуноглобулина отличного от человека животного или включает участки СОК иммуноглобулина, происходящие не от человека, связывающий домен можно гуманизировать в соответствии со способами, известными в данной области. В качестве альтернативы СОсвязывающий домен гибридных белков согласно настоящему изобретению, может представлять собой каркас, отличный от каркасной области иммуноглобулина. Другие каркасы, предусматриваемые настоящим изобретением, представляют собой участок участки СОК, обладающие специфичностью по отношению к СО86, находящиеся в функциональной конформации.
Согласно упомянутому выше в отдельных вариантах настоящего изобретения предложены полипептиды, содержащие домен или участок связывания, обладающий агонистическими свойствами по отношению к 1Ь то есть способный усиливать сигналинг 1Ь В некоторых вариантах реализации связывающий домен, обладающий агонистическими свойствами по отношению к 4Б, представляет собой 1Ь или 1Ь Рс или его биологически активный фрагмент. В других вариантах реализации связывающий домен, обладающий агонистическими свойствами по отношению к 1Ь, представляет собой одноцепочечный связывающий белок, например 8сРу, избирательно связывающийся с 1ЬК1 или рецептором 2 1Ь 1ЬК2.
Также Ю обычно образует гомодимер с аминоконцевым участком каждой молекулы мономера, связывающейся с С-концевым участком другого мономера. Указанные молекулы обозначены в настоящем документе как молекулы моно-ТБ Хотя этому и не существует эмпирических доказательств, было сделано предположение о том, что все представители указанного семейства содержат в составе альфа-спираль РБскепксЬет, н. Ю содержит четыре остатка цистеина, только один из которых является консервативным среди представителей семейства. Поскольку в строении Ю была показана У-образная складчатость, принимающая участие в его димеризации, похоже, что дисульфидные связи не имеют решающего значения для поддержания его структуры.
Б человека составляет аминокислот, она содержит сигнальную по- 8 следовательность, состоящую из 18 аминокислот и зрелый сегмент, состоящий из аминокислот. Его молекулярная масса составляет приблизительно 18 кДа в мономерной форме. Была построена карта функциональных доменов молекулы 1Б В случае В-клеток 1Б выполняет несколько связанных, но обособленных функций. Примечательно, что 1Б оказывает противоположное действие на выделение 1дЕ, вызываемое 1Ь Если 1Б присутствует во время переключения класса, вызываемого 1Ь-4, он меняет действие на противоположное; если он присутствует после коммутирования 1дЕ, он усиливает секрецию 1дЕ.
Указанное действие может иметь аутокринный механизм, поскольку известно, что в организме крысы 1Б выделяют тучные клетки. В качестве доказательства его плейотропной природы можно привести тот факт, что 1Б оказывает противоположное действие на клетки - естественные киллеры. Также он снижает способность нейтрофилов к образованию супероксидов, вследствие чего препятствует клеточной цитотоксичности, опосредованной ПМН.
H01S — Устройства со стимулированным излучением
Инструкция оператора. Дороги должны быть рассчитаны на пропуск автотранспорта с осевой нагрузкой не менее кг. Поверхность покрытия дорог должна быть ровной и обеспечивать движение самосва- ла с расчетной скоростью. Просвет между трехметровой рейкой и поверхностью покрытия дороги не должен превышать 2,5 см. Не допускается эксплуатация самосвала на дорогах с неровностями глубиной более 10 см, а в забоях и отвалах с неровностями более 20 см, при размерах, указанных выше. Вид климатического исполнения указывается в договоре на поставку. Самосвалы рассчитаны на эксплуатацию в районах, расположенных на высоте до м над уровнем моря при соответствующем изменении тягово-динамических качеств.
Электроды на кобальтовой основе
Как оставлять свои сообщения!!! Запрет на политику!!! Автор evgrafovvv « 1 2 Все » Ламповые. Автор Demo « 1 2 Все » Усилители и предусилители. Автор W. GARIK « 1
Написать комментарий