Изоусиление по отношению к печени в портовенозную и позднюю фазы. Центральная часть, которая состоит из некротической ткани, неусиленная. Я хотел бы подчеркнуть, что такое решение все-таки нужно считать чрезвычайным, подчеркнул Вьевьоровский. Сканирующая головка состоит из пластмассового миндрей портативного узи аппарата цена вашингтон и встроенного в него Акустического модуляа время от времени и интегрированной в нее печатной платы с электрическими элементами. По ее словам, схожесть основных симптомов нового штамма с сезонным ОРВИ проявляется в повышении температуры до 38 градусов и выше, ломоте в мышцах и суставах, заложенности носа, насморке, першении диодный лазер отзывы лицо горле, чихании, кашле и снижении аппетита. Типичная александритовый лазер спб купить усиления Периферическое узловое усиление в артериальной фазе.
- Неодимовый лазер родинки отзывы
- Лучший лазерный эпилятор профессиональный аппарат
- Материалы для косметологов
- Какие бывают лазеры диодные или диодные
Применение ультразвука в медицине
Аппаратно-программное обеспечение в исследовательской лаборатории. Более четверти века прошло со времени выхода первых работ, посвященных гибридизации in situ, как методу обнаружения и изучения последовательностей ДНК в хромосомах и клетках. За последние 15 лет, тем не менее, благодаря развитию флуоресцентных методик в световой микроскопии произошла революция, позволившая беспрецедентно легко и точно определять местоположение, идентифицировать и считывать данные с генетической конструкции биомедицинских образцов. Возможности гибридизации in situ могут быть значительно повышены за счет одновременного использования нескольких флуоресцентных цветов.
Многоцветная флуоресцентная гибридизация in situ FISH в своем простейшем варианте может быть использована для маркировки окрашивания многих характеристик, поскольку в гибридизации применяются различные флуорофоры. При использовании не одних цветов, а их комбинаций, с помощью микроскопов с цифровой обработкой изображений в отдельных клетках можно одновременно обнаруживать гораздо больше выделенных красителями характеристик. На рисунке 1 представлен типичный образец многцветной флуоресцентной гибридизации — FISH.
Нижний правый снимок является комбинированным изображением, на котором в цвете представлены все хромосомы-мишени. Техника многцветной FISH, объединенная с методами цифровой обработки изображений, на сегодня предлагает не имеющие себе равных возможности неизотопного обнаружения множественных последовательностей нуклеиновых кислот для анализа компонентов клеток, хромосом и генов. Флуоресценция — явление, при котором химическое соединение возбуждается на одной длине световой волны, а излучает на другой, обычно большей — применяется во всех биологических науках для изучения разнообразных структур и внутриклеточных процессов.
Технологические успехи в разработке красителей и микроскопов привели за последнее десятилетие к быстрому развитию флуоресцентных методов. В этой обзорной статье будут изложены основы FISH-метода, ограничения, с которыми столкнулись исследователи за годы применения FISH, последние разработки аппаратного и программного обеспечения, красителей и реагентов, повлиявшие на развитие этого метода, и текущие направления в этой области. Новейшие достижения этого метода, приведшие к его применению не только в исследовательских лабораториях, но в клинической диагностике, будут также рассмотрены в этой статье.
Применение FISH стремительно растет в геномике, цитогенетике, пренатальных исследованиях, биологии новообразований, радиоактивном маркировании, генном картировании, амплификации генов и основных биомедицинских исследованиях. В принципе, этот метод достаточно прост. Гибридизацией идентифицируются, или помечаются, геномные последовательности-мишени, таким образом, что можно наблюдать их местоположение и размер. Последовательности ДНК или РНК из подходящих, в зависимости от хромосомы, зондов сначала помечаются репортерными группами, которые позже идентифицируются с помощью флуоресцентной микроскопии.
Помеченный ДНК или РНК зонд потом гибридизируется с метафазными хромосомами или покоящимися ядрами на предметном стекле. После промывания и усиления сигнала образец исследуется по репортерным группам с помощью флуоресцентной микроскопии. FISH позволяет достигать очень высокого пространственного разрешения морфологических и геномных структур. Этот метод довольно быстрый, простой в осуществлении и характеризуется высокой стабильностью красителей. В зависимости от используемогзонда можно определить геном отдельной особи, целые хромосомы, участки хромосом и последовательности уникальных копий. До недавнего времени FISH была ограничена аппаратным и программным обеспечением, реагентами, технологией получения красителей и высокой стоимостью исполнения.
Серийно выпускаемые аппаратные средства для микроскопов, оптимизированные для многоцветной FISH, были недоступны до середины х годов. До этого микроскопы приходилось специально настраивать для приложений FISH. Большинство микроскопической оптики не было предназначено для обнаружения световых сигналов низкого уровня, характерных для FISH. Поскольку при использовании этого метода существенно улучшилось разрешение геномов, возросли и требования к микроскопической оптике. Представляли проблему и хроматические аберрации на многих длинах волн. Для многоцветного анализа в особенности, все линзы, включая собирающую линзу, должны были иметь коррекцию хроматических аберраций.
К тому же, очень трудно было настраивать эпифлуоресцентные источники света для получения равномерного освещения. Анализ снимков многцветной FISH требует разделения различных сигналов либо а отдельными фильтр- кубами, либо b использованием насадки светофильтров возбуждения с широкополосными дихроичными и пороговыми фильтрами. Развитие технологии фильтров исправило некоторые прежние проблемы, вызванные оптической несоосностью и разъюстировкой, вызываемых механическим переключением между отдельными фильтр-кубами. Сменные фильтры света возбуждения, применяемые с многополосными дихроичными и пороговыми фильтрами, могут эффективно работать с тремя цветами при использовании отдельных фильтров возбуждения для каждого цвета без регистрации сдвига.
Но при работе более чем с тремя цветами все же надо использовать однополосные фильтры. Для сбора данных использовались высокочувствительная цветная пленка или ПЗС прибор с зарядовой связью , и в обоих случаях были проблемы с точностью цветопередачи. В дополнение, были проблемы с наложением изображений разных цветов, снятых с одного образца с применением различных красителей-зондов. Программное обеспечение для количественного анализа образцов, приготовленных с помощью флуоресцентных реагентов, также оставляло желать лучшего, поскольку существующие системы анализа изображений не были оптимизированы для работы с флуоресцентными образцами выборки.
Визуальный анализ является трудоемкой и часто субъективной процедурой, поэтому без использования передовых достижений флуоресцентной визуализации анализ флуоресцентных выборок был труден и допускал двоякое толкование. Исследователям обычно приходилось иметь в штате собственных программистов для разработки собственных программ для анализа изображений. Самих реагентов и красителей было недостаточно для всех приложений. Например, эффективность определения места гибридизации падала с уменьшением размера зонда, что накладывало серьезные ограничения на те образцы, которые, можно наблюдать флуоресцентной микроскопией.
Число различных флуоресцентных красителей было ограничено; к тому же они обладали невысокой фотостабильностью. Но развитие технологии флуоресцентных красителей и сопутствующих технологий в рамках федерально финансируемого Проекта «Геном человека» сейчас приносят свои плоды. Уже существуют зонды для всех хромосом человека, а также растет число доступных зондов генов. Наборы для гибридизации in situ и флуоресцентно-отмеченные зонды сегодня серийно выпускаются несколькими компаниями. Цена была еще одним серьезным препятствием.
Поскольку на рынке не было серийно выпускаемых FISH систем, исследователям приходилось собирать системы, получаемые под заказ, включая реагенты, зонды, микроскоп, аппаратное и программное обеспечение по обработке изображений, анализу данных и разработке отчетов. В результате, многие исследователи, желающие использовать FISH в своих лабораториях, не имели такой возможности. Многие производители аппаратного и программного обеспечения разработали доступные серийно выпускаемые системы, как альтернативу системам под заказ. Атмосфера сотрудничества, возникшая среди многих фирм и лабораторий, занимающихся FISH, привела к новым прорывам в этой области.
И свои достижения авторы публикуемых работ рассматривают именно в рамках такого сотрудничества. Система, работающая в Соединенных Штатах и обеспечивающая средние цены для серийно выпускаемых для исследований FISH систем, объединяет компоненты многих производителей и полагается на последние достижения в программной обработке изображений, аппаратном обеспечении микроскопов и других аксессуаров. Для клинических исследовательских лабораторий эта система оказывается полезной во многих приложениях. Будучи интегрированной и автоматизированной, она позволяет проводить клинические испытания в полном объеме. Время анализа и точность результатов улучшены благодаря соотнесению многих характеристик на различных длинах волн в каждой выборке.
Эта система облегчает получение изображения, его хранение, управление базой данных, автоматическое управление микроскопом и полнофункциональный графический анализ данных. На рисунке 2 изображен экран с обзорным представлением данных программы MultiFluor. Пользователи могут просмотреть снимки и соответствующие им данные, сопоставить многопараметрические данные, полученные в разных цветах на разных длинах волн с помощью различных инструментов графического построения, включая гистограммы, диаграммы рассеяния и т.
Исследователи FISH имеют возможность автоматически получать снимки на разных длинах волн в разных фокальных плоскостях, визуализировать зонды многоцветной FISH, снабжать снимки примечаниями и распечатывать их, хранить и извлекать большие объемы данных наборов многоцветных изображений. Метафазные хромосомы многоцветной FISH могут быть проанализированы генным картированием, с помощью сравнительной геномной гибридизации СГГ , а также генерацией кариотипов. Выбранные пользователем области образца могут быть просканированы и проанализированы. Программа автоматически фокусирует систему, получает снимки на многих длинах волн, запоминает положение клеток на предметном стекле, измеряет различные характеристики, включая подсчет зонда, интенсивность флуоресценции и морфометрию клетки.
Различные характеристики на различных длинах волн могут быть соотнесены друг с другом. Дополнительной характеристикой системы является возможность ее работы с персональными компьютерами ПК , объединенными в сеть. В типичной конфигурации один компьютер является онлайновой станцией, соединенной с аппаратным обеспечением камеры и микроскопа. Этот компьютер управляет получением снимков и производит мгновенный анализ. Другие ПК являются вторичными станциями анализа информации, где обрабатываются данные, поступившие с первого ПК, или где автономно выполняется какой-либо специальный анализ. Программа позволяет представить все компоненты в ярких псевдоцветах для одновременной многоцветной визуализации.
Каждый снимок может быть интерактивно усилен для выделения интересующих характеристик. С помощью программы легко создавать гистограммы, диаграммы рассеяния, таблицы, линейные графики и другие формы представления и оценки данных рисунок 2. Аппаратные средства микроскопа также являются частью системы. Микроскопы Optiphot и более поздние модели систем Nikon Instruments, Inc.
Так, положение важных участков клетки и хромосомы может быть мгновенно восстановлено на предметном стекле простым щелчком мышки по кнопке перемещения клетки, что обеспечивает более интенсивное визуальное изучение с помощью микроскопа. Одним из наиболее важных достижений данных микроскопов является развитие осветительных систем, созданных специально для FISH приложений. С таким осветителем, исследователи, выполняющие исследования по методу FISH или другие современные исследования в свете флуоресценции, могут свободно работать с четырьмя или более различными зондами без остановки для смены светофильтров.
Получение исключительного по качеству снимка обеспечивается плавным передвижением линейной направляющей, которая используется для переключения и выбора одного из четырех фильтров. Фильтр-кубы обеспечивают лучшую яркость и очень высокую контрастность благодаря использованию фильтров возбуждения, дихроичных и дефлекторных заграждающих фильтров, встроенному экранированию засветок, высокой точности задания угла наклона отражателей и патентованным просветляющимпокрытиям. К тому же, эпифлуоресцентный осветитель может работать с четырьмя кубами одновременно, разделяя различные флуоресцентные сигналы, или может использоваться с многополосным фильтр-кубом для одновременного наблюдения нескольких флуорохромов.
Использование объективов с высоким коэффициентом светопропускания является очень важным для визуализации небольших участков хромосом. В этих объективах отсутствуют цветовые и сферические аберрации. Они обеспечивают чрезвычайно высокую контрастность и низкую фоновую автофлуоресценцию. Для создания модульных автоматизированных систем, которые станут еще доступнее для исследований и клинических приложений, несколькими производителями сейчас разрабатываются дополнительные программно управляемые принадлежности для микроскопов.
Камеры являются еще одним важным элементом таких систем. Снимки могут быть получены с помощью цифровых камер на ПЗС или видеокамер с усилением сигнала. Ключевым свойством таких систем является их способность регистрировать изображения в условиях низкой освещенности без искажений изображения. С помощью соответствующего программного обеспечения настройки камеры могут быть автоматически выставлены системой, за счет чего достигается точность и легкость использования. Описываемые FISH системы разработаны для обеспечения большей доступности исследователям, чем прежние, изготавливаемые под заказ. Они все больше применяются в онкологии, изучении патологий, цитогенетике и биологии развития.
Среди их приложений такие, как анализ интерфазных клеток по количеству пятен при наблюдении с многоцветными красителями, иммунофенотипирование, морфометрия клетки и состав ДНК. С помощью этих систем проводится анализ отклонений в числе копий хромосом, соотнесенных с общим составом ДНК, которые связаны с образованием опухолей мочевого пузыря. В пренатальных исследованиях эти системы могут использоваться для обнаружения анеуплоидий в покоящихся ядрах, связанных с пренатальными дефектами, включая синдром Дауна, синдром Тернера, синдром Клайнфельтера и другими. В клеточной биологии и биологии развития эта система может использоваться для картирования маркеров поверхности клетки и их относительного распределения, таких как рецепторы, маркеров цитоплазмы, включая белки цитоскелета, информационные РНК и специфические гены.
За последние полтора десятилетия стало понятно, что FISH метод имеет чрезвычайно большой потенциал не только как инструмент в исследовательской работе, но и в клинической диагностике в таких областях, как пренатальная диагностика, цитогенетика и развитие опухолей. Отсутствие высококачественных, доступных по цене систем, не только тормозило распространение FISH среди исследователей, но делало этот метод недостижимым для диагностических центров многих медицинских учреждений. Результаты, которые раньше могли быть получены лишь с помощью дорогостоящего, изготовленного под заказ оборудования, сейчас могут быть получены с помощью этой системы — и это является одним из наиболее важных ее достоинств. Мечта применить FISH не только для более широкого круга биомедицинских исследований, но и прямо поставить ее на службу пациентам, возможно, станет реальностью в не столь отдаленном будущем.
Эпи-флуоресцентное освещение. До недавнего времени, флуоресцентное освещение было доступно лишь на исследовательских микроскопах, оборудованных специальными светосильными объективами. Необходимость стереомикроскопии в этой методике усилилась с появлением генетически кодированных и биологически специфичных флуоресцентных белков, таких как GFP зеленый флуоресцентный белок.
КОНТРАСТНОЕ УЛЬТРАЗВУКОВОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ НОВООБРАЗОВАНИЙ ПЕЧЕНИ
Под редакцией К. Перевод с английского под редакцией д-ра техн. Гаврилова и д-ра физ. Предисловие редакторов перевода. Глава 1.
Переносные ультразвуковые сканеры DAWEI
Продолжая использовать сайт, Вы принимаете нашу политику использования файлов cookie, подробнее. По оценкам ежегодно у , пациентов диагностируется первичный рак печени и , смертельных исходов от него. Печень также является вторым наиболее распространенным местом для метастазирования, и значительно больше пациентов страдают от метастазов в печень, чем от первичного рака. Ультразвуковое контрастное исследование УКИ является весьма эффективным в выявлении и характеристике локальных поражений печени ЛПП , а также для мониторинга абляционной терапии. Ультразвуковые контрастные вещества УКВ являются чистыми внутрисосудистыми индикаторами с отличным профилем безопасности, которые идеально подходят для оценки изменений перфузии. Ограничения включают в себя плохое проникновение и нелинейное распространение артефактов.
Написать комментарий